Desarrollo y ensayo de dos procedimientos para la detección rápida de Streptococcus agalactiae en exudados vaginorrectales / Development and testing of two procedures for the quick detection of Streptococcus agalactiae in rectal-vaginal exudates

Introducción: la infección por Estreptococo grupo B (EGB) puede afectar gravemente a la madre y al feto durante la gestación y al recién nacido luego del parto. Actualmente, eldiagnóstico de colonización durante el embarazo se realiza por métodos microbiológicos a partir de exudados vaginorrectales. Objetivo: desarrollar métodos rápidos y de bajo costo para la detección del antígeno grupo específico de EGB en exudados vaginorrectales.Material y método: se utilizaron dos cepas de EGB, una autóctona (IH23) y la cepa de referencia O90R, que solo expresa el polisacárido específico de grupo. Para cada una se preparó un antisuero policlonal que se utilizó para el desarrollo de un test inmunocromatográfico y uno de aglutinación de látex. Como controles se emplearon cultivos bacterianos, polisacáridos purificados de EGB y muestras vaginorrectales. Resultados: los límites de detección obtenidos para la inmunocromatografía fueron de 210 μg/ml y 50 μg/ml para los polisacáridos purificados de sobrenadante y pared, respectivamente, no lográndose detectar antígenos de EGB en las muestras clínicas analizadas. El límite dedetección del látex fue 65 μg/ml frente al polisacárido purificado de sobrenadante de cultivo de IH23 y 6,5 x 107 UFC/ml de IH23. La sensibilidad y especificidad para el látex fue de 30% y90%, respectivamente. Conclusiones: los métodos desarrollados no alcanzaron el límite de detección requerido parasu aplicación en muestras clínicas. Esto concuerda con lo descripto en la bibliografía para ensayos rápidos basados en reacciones antígeno-anticuerpo y muestra la necesidad deagregar pasos previos de extracción y concentración o mejorar la calidad de los reactivos inmunológicos empleados.

Introduction: group B streptococcal infection (GBS) may seriously affect mother and fetuses during pregnancy, and the newborn after delivery. Today, diagnosis of colonization during pregnancy is done by means of microbiological methods of vaginal and rectal exudates. Objective: to develop fast and low cost methods to detect the GBS specific group antigen in vaginal-rectal exudates. Method: we used two EGB strains, one of the (IH23)autochthonous and the reference strain O90R, that only expresses the group specific polysaccharide. We prepareda polyclonal antiserum for each one of them which was used to conduct an immunochromatographic test and alatex agglutination test. We used bacterial culture, EGB purified polysaccharides and vagina,-rectal samples as control. Results: detection limits obtained for the immunochromatographic test were 210 μg/ml and 50 μg/ml for purifiedpolysaccharides and cell wall, respectively, there being no EGB antigens detected in the clinical samples analyzed. Latex detection limit was 65 μg/ml compared to purified polysaccharides of IH23 culture supernatant and 6,5 x 107 UFC/ml of IH23. Sensitivity and specificity for latex was 30% and 90% respectively.Conclusions: the methods used failed to reach the detection limit required for its application in our clinical samples. This agrees with what is described in bibliography about quick tests based on antigen-antibody reactions and indicated the need to add previous extractionand concentration steps or to improve the quality of the immunologic reagents used.

Introdução: a infecção por Estreptococo grupo B (EGB) pode afetar gravemente a mãe e o feto durante a gravidez e o recém nascido imediatamente depois do parto. Atualmente, o diagnóstico de colonização durante a gestação é feita por métodos microbiológicos empregando exsudados vaginorretais.Objetivo: desenvolver métodos rápidos de baixo custo para a detecção do antígeno grupo específico de EGB emexsudados vaginorretais. Material e método: foram utilizadas duas cepas deEGB, uma autóctone (IH23) e a cepa de referência O90R, que expressa somente o polissacarídeo específico do grupo.Para cada uma foi preparado um antisoro policlonal utilizado para o desenvolvimento de um teste imunocromatográfico e um de aglutinação de látex. Foram empregadoscultivos bacterianos, polissacarídeos purificados de EGB e amostras vaginorretais como controles. Resultados: os limites de detecção obtidos para a imunocromatografia foram de 210 μg/ml e 50 μg/ml para ospolissacarídeos purificados de sobrenadante e parede, respectivamente, no sendo possível detectar antígenos de EGB nas amostras clínicas analisadas. O limite dedetecção do látex foi 65 μg/ml quando comparado com o polissacarídeo purificado de sobrenadante de cultivo deIH23 y 6,5 x 107 UFC/ml de IH23. A sensibilidade e especificidade para o látex foi de 30% y 90%, respectivamente. Conclusões: os métodos desenvolvidos não alcançaramo limite de detecção requerido para sua aplicação em amostras clínicas. Estes resultados são similares aos dadosdescritos na bibliografia para ensaios rápidos baseados em reações antígeno-anticorpo e mostram a necessidade de agregar passos prévios de extração econcentração ou melhorar a qualidade dos reativos imunológicos utilizados.

Characterization and optimization of bovine Echinococcus granulosus cyst fluid to be used in immunodiagnosis of hydatid disease by ELISA

The aim of this work was to assess the influence in the diagnostic value for human hydatid disease of the composition of bovine hydatid cyst fluid (BHCF) obtained from fertile (FC) and non-fertile cysts (NFC). Eight batches from FC and 5 from NFC were prepared and analysed with respect to chemical composition: total protein, host-derived protein, carbohydrate and lipid contents. No differences were observed in the first two parameters but carbohydrate and lipid contents were shown to be higher in batches from FC than in those from NFC. Bands of 38 and 116 kD in SDS-PAGE profiles were observed to be present in BHCF from FC only. Two pools were prepared from BHCF batches obtained from FC (PFC) and NFC (PNFC), respectively. Antigen recognition patterns were analysed by immunoblot. Physicochemical conditions for adsorption of antigens to the polystyrene surface (ELISA plates) were optimized. The diagnostic value of both types of BHCF as well as the diagnostic relevance of oxidation of their carbohydrate moieties with periodate were assessed by ELISA using 42 serum samples from hydatid patients, 41 from patients with other disorders, and 15 from healthy donors. Reactivity of all sera against native antigen were tested with and without free phosphorylcholine. The best diagnostic efficiency was observed using BHCF from periodate-treated PFC using glycine buffer with strong ionic strength to coat ELISA plates

IgG recognizing 21-24 kDa and 30-33 kDa tachyzoite antigens show maximum avidity maturation during natural and accidental human toxoplasmosis

We describe the avidity maturation of IgGs in human toxoplasmosis using sequential serum samples from accidental and natural infections. In accidental cases, avidity increased continuously throughout infection while naturally infected patients showed a different profile. Twenty-five percent of sera from chronic patients having specific IgM positive results could be appropriately classified using exclusively the avidity test data. To take advantage of the potentiality of this technique, antigens recognized by IgG showing steeper avidity maturation were identified using immunoblot with KSCN elution. Two clusters of antigens, in the ranges of 21-24 kDa and 30-33 kDa, were identified as the ones that fulfill the aforementioned avidity characteristics

La avides de IgG Anti-Toxoplasma Gondii en el diagnóstico de infeccion aguda / Annual Reports 1997 / Anti-Ttoxoplasma Gondii IgG avidity in the diagnosis of acute infeccion

En el Instituto de Investigaciones en Ciencia de la Salud hemos implementado la técnica desarroollada por Pullen (1986) que utiliza tiocianato de amonio con agente disociente para le detección de avidéz de IgG por el método de Elisa-Toxo IgG (I.I.C.S., Paraguay)-. Por lo tanto , hemos realizado este estudio con el objeto de determinar la avidéz de IgG anti T. gondii en una población de mujeres embarazadas, donde 20 muestras eran de pacientes en fase aguda y 130 de paciente en fase crónica, previamente diagnosticadas clinica y serológicamente. En la distribución de valores de índice de avidéz de IgG anti-T. gondii de encontró una medida del 1,09+-0,33 en pacientes agudos y 1,91+-0,18 en pacientes crónicos, siendo la diferencia entre ambos grupos estadisticamente significativa (p<0,05). Los indices de avidéz se mantuvieron bajos ( menor a 1,5 molar de tiocianato) por más de dos meses post infección, por lo tanto la baja avidéz de IgG no es método ideal para detectar una infección aguda, pero sin embargo la presencia de una alta avidéz confirma una infeción crónica o antigua, que podemos utilizar como apoyo al diagnóstico de toxoplasmosis en la mujer embarazada

Niveles de anticuerpos anti-toxoide tetanico (AATT) en trabajadores de la salud / Annual reports 1997 / Anti-Tetanic toxoide antiboy levels in health workers

En este estudio, se midieron los niveles de antitoxina tetánica en muestras de suero de 112 trabajadores de la salud del IICS (41 bioquímicos, 10 biólogos, 26 auxiliares de laboratorio, 7 médicos, 4 sicólogos, 1 veterinario y 23 personal administrativo). Veinte eran de sexo masculino y 92 de sexo femenino con una edad media de 34 años. Los anticuerpos fueron medidos por un método de ELISA y valores por encima de 10 mU/ml fueron considerados protectivos. Todos los participantes del estudio refirieron haber recibido alguna vez la vacuna antitetánica, de los cuales el 71 por ciento recibió su última vacunación 5 años antes, 12 por ciento más de 5 años y 16 por ciento no recordaba la fecha de su ultima vacunación. Considerando el motivo de la vacunación, el 40 por ciento fue vacunado en su último embarazo, 20 por ciento por heridas y 24 por ciento dentro de un programa de vacunación. Niveles protectivos de anticuerpos se observó en el 71 por ciento y los niveles más altos fueron observados en los profesionales asistenciales (92 por ciento) y los más bajos en los auxiliares de laboratorio (38 por ciento). El mayor porcentaje de los profesionales que no tuvieron niveles protectivos (80 por ciento) se había vacunado hacía más de 10 años, siendo éste la probable causa de la falta de respuesta a la vacuna. Otras causas podrían ser deficiencias en la conservación de la vacuna o deficiencias de la respuesta inmune de estas personas. Consideramos que la implementación de un programa de vacunación en profesionales de la salud y la consecuente evaluación de anticuerpos específicos a la vacuna es perentoria

Evolution of IgG antibody response against Toxoplasma gondii tissue cyst in acute and chronic human infections

O reconhecimento do perfil dos antigenos de cistos tissulares pelos anticorpos IgG foi estudado durante a infecçäo toxoplasmotica aguda e crônica. Assim a resposta de IgG contra Toxoplasma gondii foi investida pelo immunoblotting em dois pacientes acidentalmente infectados com a variedade RH bem como em grupos de pacientes naturalmente infectados nas fases aguda e crônica. Houve uma coincidencia global da massa molecular entre antigenos de taquizoitas e cistos tissulares reconhecidos por estes soros, todavia, eles parecem näo ser as mesmas moleculas. A resposta contra cistos tissulares começa precocemente durante a infecçäo aguda e a reatividade de anticorpos e forte contra ampla variedade de antigenos. Seis faixas (entre 82 e 151 kDA) foram reconhecidas exclusivamente pelos soros das fases agudas e crônicas foram 4 grupos com intervalos de 20-24 kDa, 34-39 kDa, 58-80 kDa e 105-130 kDa. Ambos pacientes infectados acidentalmente e alguns dos pacientes naturalmente infectados mostraram fraca resposta especifica contra os antigenos de cistos tissulares

TC45, un antígeno inmunogenéticamente definido de trypanosoma cruzi: estrategias cromatográficas para su purificación / TC45, an inmunogenetically defined trypanosoma cruzi antigen: chromatographic strategies for its purification

Se describen tres protocolos para la purificación, mediante cromatografía de alta presión (FPLC), de Tc45, un antígeno inmunogenéticamente definido de T. cruzi. Dos protocolos implicaron separaciones por tamaño molecular y uno por intercambio iónico. La presencia de Tc45 en las fracciones obtenidas fue monitoreada con sueros anti T. cruzi generados en dos cepas congénitas de ratones (A.SW/A.CA) y en conejos. Aunque en las tres cromatografías se lograron grados importantes de purificación, el intercambio iónico dio los mejores resultados, al entregar una fracción que presentó una sola banda en inmunoelectrotransferencia, monitoreada con un suero de conejo poliespecífico. La metodología descrita tiene potencial para ser escalada y generar cantidades adecuadas de Tc45 para ser usado en ensayos de protección activa, secuenciación y obtención de anticuerpos monoclonales